異檸檬酸裂解酶（ICL）試劑盒說明書

產品內容：
提取液：液體50mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體15mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體15mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×3 瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入5mL 蒸餾水，充分混勻待用；用不完的試
劑仍-20℃保存；
試劑四：粉劑×3 瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入5mL 蒸餾水，充分混勻待用；現配現用；
試劑五：液體×2 支，4℃保存；臨用前每支加入560μL 蒸餾水，充分混勻待用；用不完的試
劑仍4℃保存；
試劑六：粉劑×3 瓶，4℃保存；臨用前每瓶加入5mL 蒸餾水，充分混勻待用。用不完的試劑
-20℃保存；

產品說明：
ICL（EC4.1.3.1）主要存在于植物和微生物中，油料作物種子在萌發過程中，通過乙醛酸循環
及其他過程將脂肪轉變成碳水化合物。ICL 是乙醛酸循環的關鍵酶之一。
ICL 催化異檸檬酸降解為乙醛酸和琥珀酸，乙醛酸和NADH 在LDH 的作用下生成乙醇和
NAD，NADH 在340nm 下有特征吸收峰，監測340nm 吸光度的減小速率可間接反應ICL 活性。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水
操作步驟：
一、樣本的前處理：
1、細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（10 4 個）：
提取液體積（mL）為500~1000：1 的比例（建議500 萬細菌或細胞加入1mL 提取液），超聲波
破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30 次）；15000g 4℃離心
10mi n，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，加入1mL
提取液），進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。